como contar o num. de bases de um DNA

[Luiz Carlos Rozante <rozante@ime.usp.br>]

Olá pessoal,

perguntei a um professor do IB como sabemos de antemão o tamanho de
uma moléla de DNA; ou seja, antes  de fazermos o seu sequenciamento? 

Por exemplo: o Projeto Genoma tenta sequenciar o DNA humano, mas como
 se descobriu que ele tem aproximadamente 9 bilhoes de bases?

Ele respondeu:

>      Sua duvida e' bastante pertinente, pois a resposta nao e' obvia
>para um nao biologo. A estimativa do numero de bases e' feita atraves de
>uma tecnica chamada citofotometria. O principio e' o seguinte: Uma
>camada de celulas e' disposta sobre uma lamina de microscopio. Estas 
>celulas sao fixadas (para que o material macromolecular nao se desprenda
>da laminula) e coradas com um reagente que se liga especificamente ao DNA
>(tecnicamente, o corante de Feulgen, quimico alemao do inicio do seculo
>que inventou a tecnica que consiste no uso do corante fucsina basica). Em
>seguida a lamina e' submetida a um equipamento especial chamado
>citofotometro, Um feixe de luz de uma cor que e' absorvida pelo DNA ligado
>ao corante de Feulgen varre o campo onde existem normalmente varios
>nucleos. Quanto mais DNA, mais luz e' absorvida, detectada
>por uma celula fotoeletrica. A integracao da leitura, da uma ideia da
>quantidade de DNA por nucleo, em geral na ordem de picogramas. Dai, por
>uma "regra de tres", estima-se a quantidade de bases. A coloracao fica bem
>bonita, com os nucleos rosados. A saida do equipamento e' algo do tipo
>(por nucleo):
>
>
>                 1  2  3  4 1 2
>              1 2   4  6   7  8  3 1
>           2  3 4  12 14 12 4  3  4  1
>         1  5  7  8 19 23 22 24  8  3  2
>        1  4  12  23 34  23  34  23 8  2 
>         1  3 17  23 45 23  12 13  11 7 3
>           1 3  12  14  22  23  12 8  5 
>              2  4  5  5  7  7  8  3  1
>                  1  3  4  6  6  3  1
>                        1  2  1 
>
>       Em geral tomam-se varias medidas para se obter um resultado medio.
>Lembre que a celula tem um nucleo diploide (dois genomas por celula), ou
>seja, depois o resultado e' dividido por 2.
>       Espero que sua duvida tenha sido resolvida.
>
>       Abracos,
>
>Sergio Russo Matioli                        /***************************/
>Departamento de Biologia                    /*                         */
>Instituto de Biociencias                    /*  A problem? Good!       */
>Universidade de Sao Paulo                   /*  Let's find a solution! */      
>Fone (Phone): +55 11 818-7552               /*  No solution? Good!     */
>Fax: +55 11 818-7553                        /*  So, we have no more    */
>email: srmatiol@ib.usp.br                   /*  problem!               */
>URL: http://www.ib.usp.br/~srmatiol/        /***************************/